e72评测:【评测】EGM-2血管内皮细胞培养基 2024-04-27 00:24:38 0 0 方法一: 步骤如下: 取体质量60 - 70g雄性SD 大鼠 无菌条件下取出大脑, 放入预冷DHank′s 中, 剥离软脑膜、大血管及大脑髓质, 收集大脑皮质, 剪碎成1mm3 的小块, 移入匀浆器中匀浆, 将匀浆液依次通过80 目和200 目尼龙网过滤, 收集200 目尼龙网上的微血管段。用0.12 %胶原酶37 ℃消化20min 。冲洗液冲洗2遍, 离心所得沉淀用配制的内皮细胞完全培悬浮后, 接种于明胶预先包被的培养瓶中, 37 ℃, 5 %CO2 培养箱中静置培养。 约6 - 7 天细胞基本融合成片后, 用01125 %胰蛋白酶+ 0102 %EDTA 消化, 进行传代。 方法二: 选用DMEM高糖培养基。 1.取5-7天大鼠心脏,用PBS洗净血液 2.用75%乙醇浸泡30s 3.用PBS冲洗后,剪碎,用适量0.5%胶原酶在37度摇摆水浴中消化30min,加入适量0.02%胰蛋白酶,用吸管轻轻吹打,37度水浴中消化30min。 4.分离下的细胞过200目筛网,过滤液用20%小牛血清DMEM培养基混悬离心(1000转/min,5min),未过网的弃之。 5.所得细胞悬于20%小牛血清DMEM培养基,并调整细胞浓度到104-105/ml,接种于0.2%明胶预处理的培养瓶中37度培养4小时,以去除未黏附细胞,更换含50mg/L肝素、10mg/L内皮细胞生长因子的DMEM完全培养基培养。 6.每3-4天换液一次,直至长成细胞单层,选3-4代传代内皮细胞,0.25%胰蛋白酶消化备用。 lonza提供各种原代内皮细胞及培养解决方案,欢迎搜索“北京泽平”进入咨询: 收藏(0)